Jensen Ackles incarne Dean Winchester depis 10 saisons de la série Supernatural. Mais il a aussi d'autres projets. En 2009, il a joué dans les films Ten Inch Hero où il incarnait Priestly et Meutre à la Saint-Valentin où il incarnait Tom Hanniger. En 2010, il a prêté sa voix aux personnages de Red Hood/Jason Todd dans le film d'animation Batman et Red Hood : Sous le masque rouge et Gibson dans le jeu vidéo Tron : Evolution. En 2011, il a prêté sa voix aux personnages de Kyle Madigan dans le jeu vidéo The 3rd Birthday et de Dean Winchester dans la série télévisée d'animation dérivée de la série épisode 21 et 22 All Breaks Loose. 

 

Côté vie privée, il s'est marié le 15 mai 2010 à Dallas avec l'actrice Danneel Harris qu'il avait rencontré sur le tournage de Ten Inch Hero. Le 30 mai 2013, sa femme donnait naissance à leur premier enfant : une fille prénommée Justice Jay.